核酸电泳染色剂有哪些-核酸电泳槽-生物学习资料

电泳后,核酸需经染色才能显色出带型,常用以下核酸染色剂：

1、溴化乙锭（ethidium bromide,EB）

最常用的核酸荧光染料,可嵌入核酸双链的配对碱基之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光.EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型.若EB背景太深,可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min,使非结合的EB褪色,这 样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测单链DNA或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低.

在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况.但EB带正电荷,嵌入碱基后增加了 核酸分子的刚性,使迁移率减慢,故不宜用于测定核酸分子量的大小,这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色.EB见光 易分解,应于4℃避光保存,

2、吖啶橙（acridine orange,AO）：

吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光.因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg.但吖啶橙的染色操作要求严格,应在 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min,然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时.

3、银（Ag+）试剂：

Ag+与核酸形成稳定复合物,然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒.AgNO3等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链,双链DNA及 RNA都染成黑褐色.银染法的灵敏度比EB染色高200倍左右,比亚甲蓝染色高100~1000倍,在小于0.5mm厚的凝胶中,能检测出0.5ng的 RNA,其缺点是专一性不强,能与蛋白质,去污剂反应也产生褐色,而且对DNA的染色定量不准确.银与DNA稳定结合,对DNA有破坏作用,不适于DNA 片段回收的制备.

4、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色,但灵敏度不高,而且操作时间长.胶浸泡于0.02%的亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac（pH8.3）,4℃放置1~2h,用净水洗5~8h（反复换水）,带型肉眼可见,最低检测量为 250ng.

提示：

EB、Cyber Green

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类似问题1： 【GeneFinder核酸染料与GoldView核酸染料相比哪一个使用效果好?】百度作业帮[数学科目]

建议你去看看《四种核酸荧光染料在琼脂糖凝胶中染色特性的比较分析》,第一作者：张全波.

GeneFinder检测核酸的灵敏度比EB高10倍左右,与SYBR Green I染料相当.而GoldView的灵敏度与EB相当.

所以前者比较好.

类似问题2： 【博凌科为的10000XSybrgreenI核酸染料（电泳级）有什么特点吗?】百度作业帮[生物科目]

SYBR Green I 核酸染料特点

● 无毒性：属花箐类染料,容易生物降解 ,无 致癌毒性.

● 灵敏度高：至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25～100倍.

● 信噪比高：样品荧光信号强,背景信号低.

● 操作简单：无须脱色或冲洗,即可直接用紫 外凝 胶透射仪或可见光透射仪观察.

● 适用范围广：可适用于 多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶 电泳、 脉冲电场凝胶电泳和毛细 管电

泳等.

● 使用方便：对分子生物学中常用 的酶 （如：Taq 酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用.

● 经济：价格比银染便宜.

类似问题3： 【DNA的琼脂糖凝胶电泳实验中可替代DNA的染料EB的电泳染料有哪些?优缺点各是什么?】百度作业帮[生物科目]

目前为止,对身体低毒、稳定而灵敏度不输于EB的核酸染料只有sybr green ,和 gelred

这两个的优点都是低毒性,而且稳定性很高,但是sybr green 的灵敏度不如EB,且背景荧光很强,但普通的核酸检测都能做到； gelred 是目前市场上最好的核酸染料,号称无毒,而且耐热,无背景荧光,但是加入量多容易引起拖带,当然价格也挺贵的.

除此之外,国内有些不良商贩,拿AO(丫叮橙)做EB替代品,是剧毒致癌物质,且实验效果也不如EB.

类似问题4： 电泳加绿如蓝核酸染料有什么作用[生物科目]

可以在电泳时用裸眼就能看到跑到什么程度（染料泳动速率一般和100bp左右的DNA相当）.

类似问题5： 常用的核酸染料有哪些?各有什么优缺点?

最常用的是EB,能够嵌入DNA中,特定波长紫外线激发下使核酸显现,效果最好,但是EB是致癌物,对人体有害,操作时应小心保护；

此外,生物试剂公司已经开发代替EB的产品,如golden view等,对人体无害,也不需紫外线激发,但是效果不如EB,配方也是保密的.