western blot的原理蛋白印迹的实验原理是什

　2017年26月03日发布

其实原理很简单,你要坚持某种蛋白在样品中是否含有或者大致的量,你就可以先购买或制备该蛋白的抗体,之后通过电泳实验,将蛋白样品简单分离,可以是按分子量分离也可以是按等电点分离,或者进行双向电泳,一般使用SDS-PAGE.之后进行转膜,将蛋白从胶上转移到膜上,以利于抗体杂交,之后加入抗体进行孵育杂交,之后洗掉没有结合的抗体,就可以进行显色反应了,显色反应很多,有化学发光、荧光等等.其实说白了就是让你能检测到你加入的抗体都在哪里.之后你就可以确认你的样品里有没有该蛋白,相对的量是多少.要是想要确定绝对的量就要使用ELISA 了.

提示：

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起...

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类似问题

类似问题1： westernblot的实验原理(详细的)[生物科目]

Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.

经过PAGE分离的蛋白质样品(跑PAGE 胶的原理你懂吧~),转移到固相载体（硝酸纤维素膜NC膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变（这个过程就是转膜）.

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.

类似问题2：【做westernblot的一抗孵育的原理是什么啊?如具体的分子机理，不同的蛋白质又如何选择一抗的？而一抗怎么识别蛋白的？】百度作业帮

只是简单的抗原抗体反应而已,抗体的氨基酸序列与抗原氨基酸序列相互匹配才能发生反应.所以不同的蛋白质要选择与其相对应的抗体,是特异性反应.

类似问题3： westernblot的原理及操作步骤、应用有哪些?[生物科目]

原理

Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达.

分类

Western Blot显色的方法主要有以下几种：i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光ECF iv.底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL.只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带.

其他

值得一提的是,western blot 这个名称的由来很有意思.最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来类似的出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两种技术的称为Northern和Western,与这两个技术的发明人没有关系了.

类似问题4： westernblot最后发光的原理是什么啊?westernblot最后一步曝光原理是什么啊?辣根离子催化什么什么发光的啊?[化学科目]

不是“辣根离子”的反应.而是辣根过氧化物酶在催化过氧化氢的情况下,底物被氧化而产生的发光或显色反应.化学发光底物现在有很多试剂盒来做,成分有所不同,比如作为底物的有Luminol、Pyridopyridazines等.

类似问题5：【westernblot放大原理,放大放大.为何会放大.westernblot具有一定的放大功能,即可以将微量的蛋白进行放大,放大倍数可达1000倍,从而看出目的蛋白的存在,在底片上有明显的显影.而正常的SDS-PAGE染】百度作业帮[生物科目]

少年,western blot 最后放大的方法有很多很多,从你的叙述上来看,“在底片上有明显的显影”,就是底片显影,那我们就只说说这个哈.

首先,聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白会固定到醋酸纤维膜上,然后加上该蛋白的一抗.

如果蛋白表面只有一个一抗结合位点,那么就结合一个一抗,也就没什么；如果蛋白表面有多个抗体结合位点,不久可以结合多个一抗了么,这也算是放大的一个原因.

然后,在一抗上结合二抗,二抗上用HRP标记,反应底物为过氧化物+鲁米诺,可分解底物发光.

这一步是放大中最最关键的,一个酶可以在短时间内催化非常多的底物,而没有酶就不能使底物分解.这就是有和无不同,而酶作用底物的时间越长,分解的底物越多,荧光就越明显,胶片上的条带就越深.

底物发荧光以后,用胶片显影,就可以看到明显的条带.